PENDAHULUAN
A.
Latar Belakang
Berkembangnnya ilmu pengetahuan dan teknologi seperti pada kondisi sekarang
ini, berdampak pula pada meningkatnya rasa ingin tahu seseorang terhadap apa
yang terdapat di alam semesta ini tidak luput pula perhatian kepada mikrooorganisme
yang tak dapat di lihat dengan mata telanjang. Hal ini mendasari perlunya ilmu
pengetahuan yang mempelajari tentang mikroorganisme tersebut yang disebut
dengan mikrobiologi. Ilmu ini mempelajari mikroorganisme yang merupakan bagian
lain dari mahluk hidup yang ada di muka bumi.
Prediksi, suatu bentuk praktis ilmu pengetahuan, adalah suatu produk yang
dihasilkan oleh perpaduan antara teori dan Praktik (Jawetz, etc. 2001), dalam
hal ini mikrobiologi merupakan ilmu yang mendalami mikroorganisme untuk
penerapannya dalam kehidupan agar ditemukan cara-cara terbaik dalam
penyelesaian masalah-masalah yang timbul dalam kehidupan dalam hal ini semakin
banyaknya penyakit yang disebabkan oleh bakteri, jamur, virus dan kuman yang
menyebabkan semakin kompleksnya permasalahan yang menyangkut mikroorganisme.
Namun, selain akibat yang tidak menguntungkan tersebut banyak mikroorganisme
yang dapat dimanfaatkan misalnya fermentasi.
Untuk mempelajari seluk beluk tentang mikroorganisme ini, tentunya
menggunakan teknik atau cara-cara khusus untuk mendapatkan informasi ilmiah
mengenai mikroorganisme baik sifat dan karakteristiknya. Untuk itu tentu
diperlukan peralatan untuk menunjang kegiatan tersebut. Sehingga pengenalan
akan alat-alat laboratorium mikrobiologi beserta teknik/cara penggunaan
alat-alat mutlak diperlukan. Alat-alat yang digunakan dalam praktikum
mikrobiologi harus bebas dari kontaminan baik bakteri, virus mapun jamur atau
dalamkeadaan steril. Pengetahuan tentang cara- cara atau teknik
sterilisasi mutlak diperlukan mengingat alat- alat yang digunakan pada
laboratorium mikrobiologi memiliki karakteristik yang berbeda-beda yang
tentunya akan membedakan pula teknik sterilisasinya.
Untuk mendapatkan informasi ilmiah dari mikroorganisme seringkali kita
perlu menumbuhkannya terlebih dahulu. Penumbuhan mikroorganisme tersebut
tentunya memerlukan media yang tepat. Media pertumbuhan mikroorganisme
merupakan suatu bahan yang terdiri dari campuran zat makanan (nutrien) untuk
menumbuhkan jasad renik di atas atau di dalamnya. Dengan media pertumbuhan itu
juga dapat dipelajari aktivitasnya dengan melihat perubahan-perubahan yang
terjadi pada media. Media pertumbuhan juga dapat membantu dalam melakukan
isolasi jasad renik.
Di dalam pekerjaan mikrobiologi dibutuhkan alat yang khusus untuk melihat
mikroorganisme. Salah satu alat yang sering digunakan adalah mikroskop.
Mikroskop merupakan alat bantu yang memungkinkan kita dapat mengamati objek
yang berukuran kecil. Mikroskop dalam bahasa Yunani dari micron yaitu kecil dan
scopos yaitu tujuan. Jadi, mikroskop adalah sebuah alat untuk melihat objek
yang terlalu kecil. Ilmu yang mempelajari benda kecil dengan menggunakan alat
ini disebut mikroskopi, dan kata mikroskopik berarti sangat kecil, tidak mudah
terlihat oleh mata. Daya pembesaran mikroskop menyebabkan kita dapat melihat
struktur mikroorganisme yang tidak dapat terlihat dengan mata telanjang.
Pembesaran yang dapat mikroskop adalah sekitar 100 kali sampai 400.000
kali. Ada dua jenis mikroskop berdasarkan pada kenampakan objek yang
diamati, yaitu mikroskop dua dimensi (mikroskop cahaya) dan mikroskop tiga
dimensi (mikroskop stereo). Sedangkan berdasarkan sumber cahayanya, mikroskop
dibedakan menjadi mikroskop cahaya dan mikroskop electron.
Perbesaran yang dicapai oleh suatu mikroskop adalah hasil kerja dua sistem
lensa yaitu lensa objektif dan lensa okuler. Lensa objektif yang terdekat
dengan spesimen, dan lensa okuler, terletak pada ujung atas mikroskop, terdekat
dengan mata. Sistem lensa objektif memberikan perbesaran mula-mula dan
menghasilkan bayangan nyata yang kemudian diproyeksikan ke atas lensa okuler.
Bayangan nyata tersebut, pada gilirannya, diperbesar oleh okuler untuk
menghasilkan bayangan pada mikroskop
Pada mikroskop cahaya atau mikroskop monokuler mempunyai perbesaran
maksimum 1000 kali. Mikroskop ini mempunyai kaki yang berat dan kokoh dengan
tujuan agar dapat berdiri dengan stabil. Mikroskop cahaya memiliki tiga sistem
lensa yaitu lensa objektif, lensa okuler, dan kondensor. Lensa okuler bisa
berbentuk lensa tunggal (monokuler) atau ganda (binokuler). Pada ujung bawah
mikroskop terdapat tempat dudukan lensa objektif yang bisa dipasangi tiga lensa
atau lebih. Di bawah tabung mikroskop
terdapat meja mikroskop yang merupakan tempat preparat.Sistem lensa
yang ketiga adalah kondensor. Kondensor berperan untuk menerangi objek dan
lensa-lensa mikroskop yang lain (Anonim, 2012).
B.
TUJUAN PRAKTIKUM :
1.
Untuk mempelajari lebih dalam
tentang kehidupan mikroorganisme serta manfaatnya.
2.
Untuk mempelajari teknik
inokulasi biakan mikroorganisme.
3.
Sebagai syarat mahasiswa UTP
menempuh ujian semester III.
I. PENGENALAN ALAT dan PEMBUATAN
MEDIA
A.
TUJUAN.
Pada
praktikum ini mahasiswa dapat menjelaskan tentang Alat-alat Laboratorium
Mikrobiologi dan pemakaian skala cara pembuatan media.
B.
TINJAUAN
PUSTAKA.
Mikrobiologi adalah salah satu
cabang ilmu dari biologi yang mempelajari tentang organisme yang mikroskopik
yakni meliputi bakteri, virus, fungi, alga dan protozoa.Mikrobiologi boleh
dikatakan merupakan ilmu yang masih baru.Dunia jasad renik barulah ditemukan
sekitar 300 tahun yang lalu dan makna sesungguhnya mengenai mikroorganisme itu
barulah dipahami sekitar 200 tahun kemudian.Selama 40 tahun terakhir,
mikrobiologi muncul sebagai bidang biologi yang sangat berarti karena
mikroorganisme digunakan oleh para peneliti dalam penelaah hampir semua gejala
biologis yang utama.
Dalam melakukan praktikum
mikrobiologi, tentunya digunakan berbagai macam alat dengan fungsinya
masing-masing sehingga sangat perlu keterampilan dalam menggunakan alat-alat
mulai dari cara membersihkan sampel, penggunaan, dan penyimpanannya. Olehnya
itu, maka perlu diadakan praktikum ini yaitu agar dapat memberikan pemahaman
kepada kita mengenai alat-alat yang sering digunakan pada praktikum
mikrobiologi (Ariandi, 2010).
Pekerjaan mikrobiologi
banyakmenggunakan alat-alat geas,terutama cawan petri, tabung reaksi, gelas
objek, gelas penutup, gelas piala, gelas Elyemayer dan lain-lain. Kebersihan
Alat-alat gelas tersebut sangat menentukan kebersihan kegiatan yang kita
lakukan, baik untuk menghindari kontaminasi maupun untuk kejelasan dan
ketepatan pengamatan. Dalam hal ini kebersihan dapat di artikan sebagai jernih,
kering, serta bebas debu dan lemak.(Anonim,2012)
Pembersihan alat gelas di lakukan
sebelum dan sesudah kegiatan praktek, sesuai dengan keadaan, apakah sudah
bersih atau belum.Alat-alat gelas di gunakan harus selalu dikembalikan dalam
keadaan bersih.Untuk memudahkan pembersihan, alat gelas sebaiknya dikelompokan
berbagai jenis dan ukurannya. Sebelum dibersihkan, alat gelas juga harus di
bersihkan dulu dari segala bentuk kotoran, seperti : medium kultur (media
biakan), selotip, marker, dan lain-lain. Marker permanen dapat di hilangkan
dengan menyapukan kapas yang telah di basahiaseton pada bagian yang di
bersihkan.(Anonim,2012).
C.
ALAT DAN BAHAN
Alat :
Jarum ent, Jarum Ose, Gelas
Preparat, Pipet drop, Tabung reaksi, Erlen meyer, Beker gelas, Gelas ukur,
Pipet volume, Petridish, Bunsen, Oven, Auto eleve, Mikroskop, kertas
pembungkus, karet gelang, aluminium foil
Bahan :
Kentang, dekstrosa, agar-agar, daging peptone, aquadest.
D.
CARA KERJA
Ø Menyiapkan
alat-alat.
Ø Memahami fungsi
alat dan berbagai cara menggunakannya.
Ø Menggambar
alat-alat dan menjelaskan fungsinya.
1.
Membuat media PDA
Cara kerja :
a.
Kupas kentang, cuci dan potong kecil-kecil, timbang 200g,
kemudian rebus selama 1 jam dengan tetap menjaga volume air 1000ml.
b.
Saringlah sehingga memperoleh filtrat, kedalam filtrat
dimasukkan dekstrosa 10g dan agar-agar 15g, diaduk sampai larut homogen.
c.
Masukkan kedalam erlenmeyer dan tutup dengan kapas,
dibagian luarnya ditutup aluminium foil atau kertas dan dikaret.
d.
Sterilkan dalam autoclave suhu 121oC, 15
menit.
E.
HASIL DAN
PEMBAHASAN
1.
Hasil pengamatan
No.
|
Nama
Alat
|
Fungsi
|
Kegunaan
dan Cara Pemeliharaan
|
|
1.
|
Gelas
piala (beaker)
 |
Gelas
piala berfungsi sebagai tempat penyimpanan medium, memanaskan larutan,
pencampuaran larutan dan menampung hasil dari penyaringan dalam ukuran
tertentu.
|
Alat
ini dapat disterilisasikan dengan dicuci sampai bersih ataupun dengan ditutup
terlebih dahulu bagian atas dengan kapas, lalu disterilisasi dengan
menggunakan autoclave.
|
|
2.
|
Gelas
erlenmeyer
 |
Gelas
erlenmeyer berfungsi sebagai tempat penyimpanan medium, memanaskan larutan,
dan menampung hasil dari penyaringan.
|
Alat
ini dapat disterilisasikan dengan ditutup terlebih dahulu bagian atas dengan
kapas, lalu disterilisasi dengan menggunakan autoclave.
|
|
3.
|
Petridish
(cawan petri)
 |
Cawan
petri berfungsi untuk pembuatan kultur media.
|
Alat
ini disterilisaskan bersama dengan kertas saring didalamnya. Sebelumnya,
cawan petri dicuci dan dikeringkan dan setelah itu bungkus dengan kertas
putih coklat untuk disterilisasi dengan oven.
|
|
4.
|
Tabung
reaksi
 |
Tabung
reaksi berfungsi sebagai tempat media pertumbuhan mikroba dalam bentuk media
tegak atau miring yang disumbat kapas.
|
Caranya
yaitu pada waktu memanaskan media yang ada pada tabung reaksi, harus dalam
keadaan miring diatas nyala api.
|
|
5.
|
Gelas
ukur
 |
Gelas
ukur digunakan untuk menakar air suling danbahan kimia yang akan digunakan.
|
Gelas
ukur ada yang tahan panas dan ada pula yang tidak tahan panas. Pembuatan
larutan sterilisasi eksplan, yaitu chlorox selalu menggunakan gelas ukur.
Pada saat menggunakannya perhatikan caramembaca skalanya.
|
|
6.
|
Penutup
tabung reaksi.
 |
Penutup
tabung reaksi berfungsi untuk menutup tabung reaksi.
|
Dapat
disterilkan dengan autoclave.
|
|
7.
|
Pipet
Tetes
 |
Pipet
tetes berfungsi sebagai pengambil larutan atau sampel dengan ukuran tetes.
|
Caranya,
yaitu cairan disedot dengan bantuan filter (penyedot). Kemudian teteskan
seberapa yang diinginkan.
|
|
8.
|
Bunsen
 |
Untuk
menyetrika alat .
|
||
9.
|
Pipet
ukur
 |
Pipet
ukur berfungsi sebagai pengambil larutan atau sampel sesuai dengan jumlah
yang kita tentukan.
|
Cara
penggunaanya sama seperti pipet tetes, tapi memiliki ukuran berapa banyak
cairan yang akan diambil.
|
|
10.
|
Jarum ent
 |
Untuk
mengambil biakan atau inokulasi.
|
||
11.
|
Jarum ose
 |
Untuk memindahkan biakkan materi
atau inokulasi.
|
||
12.
|
Gelas preparat dan penutup
 |
Tempat mikrobia yang akan diamati
menggunakan mikroskop.
|
||
No.
|
Nama
Alat
|
Fungsi
|
Kegunaan,
Cara Mengoperasikan, dan Pemeliharaan Alat
|
|
1
|
Autoclave
 |
Berfungsi
untuk sterilisasi media maupun alat-alat seperti pipet, scalpel, pinset,
cawan petri, botol mutlak dibutuhkan autoclave.
|
Caranya
mengisi air sampai dasar yang berlubang. Kemudian nyalakn alat. Masukkan
materi yang akan disterilkan. Selanjutnya, penutupautoclave dipasang dan
sekrup dikencangkan. Kran pengatur keluar uap dibiarkan terbuka dan ditutup
hingga suhu 121ºC, setelah itu, biarkan hingga tekanan turun 0ºC dan dibuka
secar perlahan.
|
|
2.
|
Oven
 |
Berfungsi
untuk sterilisasi alat-alat yang tahan terhadap panas tinggi, misalnya cawan petri
tabung reaksi, Erlenmeyer, dan lain-lain.
|
Prinsip
kerjanya adalah alat yang disterilkan dibungkus dalam kertas
kemudiandimasukkan dalam oven lalu ditutup. Setelah itu mengaktifkan tombol
power dan mengatur suhu yang diinginkan, menggunakan temperature suhu 180ºC
selama 2 jam.
|
|
3.
|
Inkubator
 |
Inkubator
berfungsi sebagai menumbuhkan bakteri pada suhu tertentu, menumbuhkan ragi dan
jamur, dan menyimpan biakan murni mikroorganisme pada suhu rendah.
|
Prinsip
kerjanya yaitu mengubah energy listrik menjadi energy panas.
|
|
4.
|
Incease
 |
Incease
berfungsi sebagai tempat untuk mengambil bakteri untuk menghindari
kontaminasi langsung.
|
Untuk
mensterilkan bagian dalamnya dengan cara menyemprotkan alcohol 95% atau formalin
cair.
|
|
7.
|
Mikroskop
 |
Mikroskop
berfungsi sebagai alat bantu untuk melihat mikroorganisme yang tak dapat
dilihat oleh mata.
|
Cara
penggunaan yaitu dengan melatarbelakangi bagian belakang mikroskop
|
|
2.
PEMBAHASAN
Dari hasil pengamatan alat-alat tersebut memiliki fungsi dan
penggunaan yang berbeda, meskipun ada juga fungsidan penggunaannya hampir
sama.Alat-alat ini juga terdiri dari sterilisasi, yaitu alat yang digunakan
untuk sterilisasi.Sterilisasi adalah usaha untuk membebaskan alat-alat maupun
bahan-bahan dari semua kehidupan.Alat isolasi adalah alat yang digunakan untuk
mengisolasi mikroorganisme dan alat inokulasi mikroba.
Dan untuk menjaga kebersihan alat dan
laboratorium sesudah dan sebelum menggunakan alat dan bahan mengecek dan
melihat bahan dan alat tersebut dalam kondisi bersih dan pada saat
mengembalikan alat dan bahan harus di tempatkan di tempat semula dalam keadaan
bersih juga.
PEMBAHASAN PDA :
Pada praktikum kali ini
saya mempelajari cara pembuatan medium. Agar dapat tumbuh dengan baik suatu
mikroorganisme sangat memerlukan media sebagai tempat hidupnya. Media adalah
substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh dan sesuai dengan lingkungannya. Kehidupan
mikroorganisme tergantung pada nutrisi dalam substrat/medium dan faktor
lingkungan yang baik, karena tidak semua bakteri, khamir dan kapang dapat
tumbuh dengan satu medium yang sama. Jenis medium untuk pertumbuhan
mikroorganisme sangat bervariasi, tergantung dari apa yang di jadikan dasar
penanaman.
F.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil praktikum maka dapat disimpulkan bahwa
alat-alat pada laboratorium
mikrobiologi terbagi atas alat-alat yang terbuat dari gelas, alat-alat
sterilisasi, mikroskop, dan alat-alat lain. Yang termasuk alat-alat gelas
antara lain tabung reaksi, tabung durham, erlenmeyer, gelas ukur, pipet tetes,
cawan petri dan penutup, batang gelas bengkok, corong, batang pengaduk, gelas
kimia, thermometer, dan labu ukur.
KESIMPULAN
PDA :
a.
Kehidupan mikroorganisme tergantung pada
nutrisi dalam substrat/medium dan faktor lingkungan yang baik.
b.
Media merupakan suatu alat
untuk tempat dan tumbuh bagi mikroorganisme.
c.
Berdasarkan bentuknya, medium dibagi
3 jenis, yaitu medium cair, medium semisolid, dan medium padat.
d.
Sterilisasi adalah suatu usaha untuk
membebaskan alat-alat, bahan, dan kemasan dari segala macam bentuk kehidupan
terutam mikro organism.
e.
Setiap pembuatan media harus
disterilkan terlebih dahulu agar hasil yang didapatkan maksimal.
II. KULTIVASI BAKTERI dan JAMUR
A.
TUJUAN
1.
Melihat
macam-macam koloni mikroorganisme yang berasal dari udara dengan variasi lama
waktu berhubungan dengan udara.
2.
Memberikan keterampilan kepada mahasiswa, agar mampu menumbuhkan dan
memisahkan bakteri atau jmur dari keberadaannya di udara dan permukaan benda
dan yang jamur pada biji kacang tanah.
B.
TINJAUAN
PUSTAKA.
Mikroorganisme
sebagai makhluk hidup sama dengan organisme hidup lainnya sangat memerlukan
energi dan bahan-bahan untuk membangun tubuhnya, seperti dalam sintesis
protoplasma dan bagian-bagian sel lainnya. Bahan-bahan tersebut disebut
nutrien. Untuk memanfaatkan bahan-bahan tersebut, maka sel melakukan suatu
kegiatan-kegiatan, sehingga menyebabkan perubahan kimia di dalam selnya. Semua
reaksi yang teratah yang berlangsung di dalam sel ini disebut metabolisme.
Metabolisme yang melibatkan berbagai macam reaksi di dalam sel tersebut, hanya
dapat berlangsung atas bantuan dari suatu senyawa organik yang disebut juga
biokatalisator yang dinamakan enzim (Djide, 2006).
Peran
utama nutrien adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai
aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik (reaksi yang menghasilkan energi).
Oleh karenanya bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber energi,
sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan
nitrogen. “Selain itu, secara umum nutrient dalam media pembenihan harus
mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik oranisme baru.
Saat
ini media agar merupakan media yang sangat umum digunakan dalam
penelitian-penelitian mikrobiologi. Media agar ini memungkinkan untuk
dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel, karakterisasi morfologi, sampai
penghitungaan bakteri yang dikenal dengan namatotal plate count. Bentuk koloni
bakteri dan warna-warninya mudah sekali dikenali dengan media ini dengan cara
mengubah komposisi nutrien atau menambahkan indikator
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari
campuran zat-zat hara (nutrien) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan
menggunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan,
pengujian sifat fisiologis dan perhitungan sejumlah mikroba. Supaya mikroba
dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi
syarat-syarat, antara lain : harus mengandung semua zat hara yang mudah
digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan dan
pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh, tidak mengandung
zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan
steril sebelum digunakan, agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh dengan
baik.
Suatu medium yang mengandung substansi kompleks
seperti ekstrak daging sapi, ekstrak khamir, tripton, dan darah disebut sebagai
medium buatan atau medium kompleks (artificial or complex medium). Sebagai
lawannya, kita acu medium yang rumus kimia masing-masing ramuannya dapat
dituliskan sebagai medium sintesis (synthtetical medium) atau medium yang
ditentukan (difined medium). Medium sintesis mungkin sangat rumit dan sangat
berbeda sesuai dengan organisme tertentu yang hendak ditumbuhkan. Untuk
sebagian besar, medium sintesis hanya digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme
di laboratorium penelitian.
Agar-agar, gelatin atau gel silika merupakan
bahan untuk membuat medium menjadi padat. Namun, yang paling umum digunakan
adalah agar-agar. Meskipun bahan utama agar-agar adalah gelatin, yaitu suatu kompleks
karbohidrat yang diekstraksi dari alga marin genus gelidium, namun sebagian
mikroorganisme tidak dapat menggunakannya sebagai makanan sehingga agar-agar
dapat berlaku hanya sebagai pemadat.
Untuk perhitungan mikroorganisme mungkin yang
paling sering digunakan adalah prosedur penumbuhan dalam agar. Secara sederhana
suatu contoh suspensi sel atau bahan pangan homogenat diinokulasi ke dalam atau
ke atas media nutrien agar dan setelah diinkubasi, jumlah koloni yang terbentuk
dihitung. Karena satu koloni menunjukkan jumlah sel dalam larutan asalnya.
Perhitungan secara penumbuhan dalam cawan petri
dapat dilakukan dengan menggunakan tiga metode yaitu : dalam metode penuangan,
1,0 ml contoh dipindahkan ke dasar cawan dan dituangkan diatasnya 15-20 ml
media agar yang telah didinginkan sampai 45o – 50oC
dan dicampur serata mungkin. Setelah inkubasi, koloni baik yang tumbuh di dalam
agar atau dipermukaannya dihitung. Prosedur ini termasuk yang paling peka,
sampai sejumlah 20 sel/ml dapat dihitung. Metode ini tidak dapat diterapkan
dalam studi lapangan karena dibutuhkan alat-alat untuk mencairkan dan
mendinginkan media agar. Berikutnya metode penyebaran pada permukaan cawan
dilakukan dengan menggunakan 0,1 ml larutan contoh disebaratakan di permukaan
media agar yang tersedia dengan tongkat gelas yang melengkung (bent glass rod)
yang telah disterilkan. Setelah inkubasi, koloni yang tumbuh di permukaan dari
media dihitung. Karena penggunaan volume larutan yang sedikit yaitu 0,1 ml,
maka kepekaannya sekitar 300 sel/ml. Oleh karena media agar dalam cawan telah
disiapkan lebih dahulu, maka metode ini dapat diterapkan dalam studi lapangan.
Dan terakhir adalah metode penetesan pada cawan, media yang dipersiapkan
terlebih dahulu dibagi-bagi menjadi 3 atau 4 sektor dan setetes larutan contoh
(0,02 ml) dipindahkan ke masing-masing sektor. Setelah tetesan tersebut
dibiarkan kering, cawan petri kemudian diinkubasi. Suatu pipet penetes yang
telah dikalibrasi dipergunakan untuk mengukur dan memindahkan tetesan.
Pengenceran contoh diatur sedemikian rupa sehingga diperoleh antara 5 sampai 20
koloni terbentuk dari setiap tetesan pada permukaan media agar. Satu keuntungan
metode ini adalah bahwa perhitungan dapat dilakukan 3-4 kali ulangan sekaligus
dalam satu cawan, sehingga dapat menghemat bahan-bahan untuk uji mikrobiologi.
Contoh bahan yang mengandung sekecil 250 sel setiap ml masih dapat dihitung dan
teknik ini dapat diterapkan dalam percobaan-percobaan lapangan.
C.
BAHAN
DAN ALAT
Bahan
: 6 tabung agar Nurien (na), biji kacang tanah, media PDA, media NA.
Alat
: Cawan petri, jarum ose 1(satu), tabung air steril, batang tusuk gigi, batang penyeka steril, pinset, lampu bunsen.
D.
CARA
KERJA
1. Kulivasi
Bakteri
Ø Siapkan
agar nutrien dengan cara memanaskan media dalam tabung sampai mencair, kemudian
menuangkan kedalam petridish.
Ø Satu
petridish diinokulasi dengan udara dengan muka tutup petri dan membiarkannya
terbuka selama 1 jam.
Ø Satu
petridish diinokulasi dengan cara mencelupkan batang penyeka steril kedalam air
steril, kemudian diulaskan ke atas meja atau benda lain, dan dioleskan kedalam
media,(setelah dingin).
Ø Air
ludah diambil dengan jarum ose, inkulasikan kedalam media.
Ø Kotoran
gigi diambil dengan tusuk gigi, inokulasikan kedalam media.
Ø Celupkan
batang gelas kedalam air steril, diulaskan ke permukaan kulit, kemudian
inokulasikan ke media.
Ø Bersihkan
langsung ke dalam petri berisi media.
Ø Semua
cawan petri diberi label yang berisi
kelompok, sumber mikrobia, dan tanggal inkulasi, tempelkan label pada bagian
bawah petri.
Ø Inokulasikan
cawan petri inokulasikan dalam keadaan terbalik, pada suhu kamar selama 6 hari.
Ø Pengamatan
dengan mencatat bentuk koloni dan warnanya (di gambar).
2. Kultivasi
Jamur
Ø Media
PDA dipanaskan dalam tabung sampai cair lalu di tuangkan kedalam cawan petri.
Ø Setiap
cawan petri diberi nama sesuai bahannya.
Ø Media
yang sudah dingin lalu dimasukkan masing-masing biji kedalam cawan petri dengan
menggunakan pinset steril.
Ø Media
tersebut lalu didiamkan (inkubasi) selama 3-6 hari.
Ø Kemudian
media dilakukan pengamatan dan dihitung banyaknya tingkat pertumbuhan jamur
yang berkembang.
E.
HASIL
PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
1. Hasil
Pengamatan kultivasi bakteri.
No
|
Pertumbuhan koloni
|
keterangan
|
|||||
Control
|
Permukaan meja
|
Air ludah
|
Udara
|
Permukaan kulit
|
Kacang tanah
|
||
1
|
+
|
-
|
+
|
+
|
+
|
-
|
1. warna menjadi buram.
2. terdapat bakteri setiap 24 jam.
3. pada kacang tanah terdapat
pertumbuhan miselium.
|
2
|
++
|
+
|
++
|
++
|
++
|
++
|
|
3
|
+++
|
++
|
+++
|
+++
|
+++
|
++++
|
|
4
|
++++
|
++++
|
++++
|
++++
|
++++
|
||
No
|
Hasil
Pengamatan
|
Keterangan
|
|||
1.
|
KONTROL
Perbesaran
10x10/0.25
|
1.
Bentuk koloni control.
2.
Warna koloni abu-abu.
3.
Bentuk permukaan koloni datar.
|
|||
2.
|
PERMUKAAN
TANGAN
Perbesaran
10x10/0.25
|
1.
Bentuk koloni permukaan tangan.
2.
warna koloni abu-abu.
3.
bentuk permukaan koloni datar.
|
|||
3.
|
UDARA
Perbesaran
10x10/0.25
|
1.
Bentuk koloni udara.
2.
warna koloni abu-abu.
3.
bentuk permukaan koloni datar.
|
4.
|
AIR LUDAH
Perbesaran
10x10/0.25
|
1.
Bentuk koloni air ludah.
2.
Warna koloni abu-abu
3.
Bentuk permukaan koloni cembung.
|
Pada Jamur :
Kontrol
Perbesaran
: 10 X 10/0,25
|
Keterangan
Terdapat jamur mungkin karena pada
saat penuangan dilakukan tidak aseptik
|
|||
perlakuan
Perbesaran : 10 X 10/0,25
|
Keterangan
Terdapat misilium disekitar kacang
tanah yang sangat banyak.
|
|||
mikroskopis
Perbesaran : 10 X 10/0,25
|
Keterangan
Jamur pada kacang tanah dilihat secara
mikroskopis.
|
2. Pembahasan
Setelah medium kultur baik medium PDA dan medium
NA dipanaskan hingga mencair, medium PDA dan NA cair dituangkan ke dalam 3
cawan petri diatas nyala lampu spiritus di dalam laminar air flow. Kemudian
cawan petri digoyang pelan-pelan hingga medium merata kemudian diamkakan hingga
membeku. Setelah itu, cawan petri yang satu berisi PDA dan satu berisi NA
dibuka 5 detik dan tutup kembali dengan memeberi label. Dua cawan petri yang
satu berisi PDA dan satu berisi NA selama 30 detik dan tutup kembali dengan diberi
label. Kemudian dua cawan petri yang satu berisi PDA dan yang lain berisi
NA dibuka dengan memberi label. Setelah itu, semua cawan petri
diinkubasikan dalam suhu kamar dalam keadaan tetap tertutup dan terbungkus.
Lalu tunggu hingga dua hari berikutnya untuk diamati.
Setelah dua hari, pada masing-masing
Medium kultur baik PDA dan NA akan tampak koloni-koloni seperti debu.
Walaupun telah tampak koloni, tetapi masih samar-samar untuk diamati. Pada
medium PDA menumbuhkan koloni jamur, sedangkan medium NA menumbuhkan
koloni-koloni bakteri. Pada medium PDA, telihat bentuk jamur yang menyerupai
hifa jamur dengan memiliki warna putih yang transparan. Pada medium PDA hanya
memiliki satu koloni jamur. Pada medium kultur NA yang membentuk berbagai
koloni-koloni bakteri, tetapi pada cawan petri belum bisa terlihat baik secara
bentuk koloni, jumlah koloni, maupun warna koloni. Ini mengindikasikan bahwa pada medium kultur
NA belum bisa tumbuh dalam waktu dua hari.
Pada hari kelima pengamatan, medium kultur PDA memperlihatkan koloni jamur
dengan sangat jelas. Ciri-ciri koloni jamur yang dimurnikan pada medium kultur
PDA ini adalah :
1.
Memiliki
bentuk bulat seperti hifa jamur.
2.
Pada
jamur terlihat adanya garis lurus sejajar.
3.
Jamur
memiliki warna putih.
4.
Jamur
yang dimurnikan berjumlah satu pada medium PDA.
Untuk
medium kultur NA yang seharusnya memperlihatkan berbagai koloni-koloni bakteri
tidak tampak. Pada cawan petri yang didalamnya berisi medim NA ini hanya
terlihat goresan yang telah digores untuk menumbuhkan koloni-koloni bakteri.
Ini berarti, medium kultur NA tidak ditumbuhi oleh bakteri karena adnya
beberapa factor kemungkinan, yaitu :
a.
Terjadi
kesalahan dalam proses isolasi.
b.
Medium
yang ditumbuhkan tidak terdapat bakteri karena menumbuhkan bakteri lebih sulit
dibanding menumbuhkan jamur.
Pembahasan jamur pada Kacang tanah
a.
Pada saat penuangan
media PDA, pada cawan petri mulut cawan di panaskan dengan nyala api dengan
cara memutar mulut cawan diatas api bunsen yang bertujuan untuk mensterilkan
alat.
b.
Cawan dibalik (tutup dibawah)
agar uap air yang berasal dari media yang masih panas tidak menetes kemedia dan
dan tidak menyebabkan kontaminasi serta tidak menggangu pengamatan koloni yang
tumbuh.
c.
Hasil pengamatan
mikroskopis menunjukkan adanya benang-benang hifa dan beberapa bagian membentuk
bulatan (sporangium)
d.
Morfologi pada biji
kacang tanah berwarna keabu-abuan.
F.
KESIMPULAN
a.
Bakteri terdapat
disemua tempat (udara, permukaan kulit, air ludah).
b.
Koloni bakteri berupa
seprtinpercikan mentega bentuknya menyerupai titik-titik kadang permukaannya ada yang cembung
dan pada pengamatan praktikum kali ini
koloni bakteri berwarna abu-abu.
c.
Koloni bakteri
mempunyai bentuk yang berbeda-beda.
d.
Pada permukaan biji
terdapat spora jamur.
e.
Koloni jamur nampak
seperti tumpukan ramabut atau kapas.
III.
PENGECATAN BAKTERI
A. TUJUAN PRAKTIKUM
·
Berlatih melakukan berbagai macam pengecatan bakteri.
·
Mengetahui langkah pengecatan bakteri.
·
Mengetahui jenis bakteri berdasarkan sifat pengecatan.
B. Tinjauan Pustaka
Bakteri memiliki beberapa bentuk
yaitu basil (tongkat), coccus, spirilum. Bakteri yang berbentuk tongkat maupun
kokus dibagi menjadi beberapa macam. Pada bentuk basil pembagiannya yaitu basil
tunggal, diplobasil, dan tripobasil.Sedangkan pada coccus dibagi menjadi
monococcus, diplococcus, sampai stophylococcus. Khusus pada spirilum hanya
dibagi dua yaitu setengah melengkung dan melengkung (Dwidjoseputro.1998).
Melihat dan mengamati bakteri
dalam kedaan hidup sangat sulit, karena selain bakteri itu tidak berwarna juga
transparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan
suatu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling
utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi (Dwidjoseputro.1998).
Prinsip dasar dari pewarnaan ini
adalah adanya ikatan ion antara komponen seluler dari bakteri dengan senyawa
aktif dari pewarnaan yang disebut kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya
muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarnaan. Berdasarkan
adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.
Teknik Pewarnaan bukan pekerjaan
yang sulit tapi perlu ketelitian dan kecermatan bekerja serta mengikuti aturan
dasar yang berlaku (Lay.1994).
Oleh karena itu yang melatar
belakangi praktek ini yaitu untuk mengetahui teknik pewarnaan mikroorganisme
sehingga mempermudah dalam melihat bagian-bagian bakteri.
Mikroorganisme yang ada di alam
ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas, begitu pula dengan
bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air,
dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati
bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode
pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat
fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian
pengecatan.
Mikroorganisme sulit dilihat dengan mikroskop cahaya, karena tidak mengadsorpsi
ataupun membiaskan cahaya. Alasan inilah yang menyebabkan zat warna digunakan
untuk mewarnai mikroorganisme ataupun latar belakangnya. Zat warna mengadsorpsi
dan membiaskan cahaya sehingga kontras mikroorganisme disekelilingya
ditingkatkan. Penggunaan zat warna memungkinkan pengamatan struktur sel seperti
spora dan bahan infeksi yang mengandung zat pati dan granula fosfat. Pewarnaan
yang digunakan untuk melihat salah satu struktur sel disebut pewarnaan khusus.
Sedangkan pewarnaan yang digunakan untuk memilahkan mikroorganisme disebut
pewarnaan diferensial yang memilahkan bakteri menjadi kelompok gram positif dan
gram negatif. Pewarnaan diferensial lainnya ialah pewarnaan ziehl neelsen yang
memilihkan bakterinya menjadi kelompok-kelompok tahan asam dan tidak tahan asam
(Dwidjoseputro.1998).
Pengenalan bentuk mikroba
(morfologi), kecuali mikroalgae harus dilakukan pewarnaan terlebih dahulu agar
dapat diamati dengan jelas (Hadiutomo. 1990). Pada umumnya bakteri bersifat
tembus cahaya, hal ini disebabkan karena banyak bakteri yang tidak mempunyai
zat warna (Waluyo, 2004). Tujuan dari pewarnaan adalah untuk mempermudah
pengamatan bentuk sel bakteri, memperluas ukuran jazad, mengamati struktur
dalam dan luar sel bakteri, dan melihat reaksi jazad terhadap pewarna yang
diberikan sehingga sifat fisik atau kimia jazad dapat diketahui (Hadiutomo.
1990).
Metode pengecatan pertama kali
ditemukan oleh Christian Gram pada tahun 1884. Dengan metode ini. Bakteri dapat
dikelompokkan menjadi dua yatu, bakteri gram positif dan bakteri gram negative.
Yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi
atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya sehingga
pengecatan gram tidak bias dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai
dinding sel sepertiMycoplasma sp (Waluyo, 2004).
Berhasil tidaknya suatu pewarnaan
sangat ditentukan oleh waktu pemberian warna dan umur biakan yang diwarnai
(umur biakan yang baik adalah 24 jam). Umumnya zat warna yang digunakan adalah
garam-garam yang dibangun oleh ion-ion yang bermuatan positif dan negatif
dimana salah satu ion tersebut berwarna. Zat warna dikelompokkan menjadi dua,
yaitu zat pewarna yang bersifat asam dan basa. Jika ion yang mengandung warna
adalah ion positif maka zat warna tersebut disebut pewarna basa. Dan bila ion
yang mengandung warna adalah ion negatif maka zat warna tersebut disebut
pewarna negatif (Hadiutomo. 1990).
Zat warna yang digunakan dalam pewarnaan bersifat basa dan asam. Pada zat warna
basa bagian yang berperan dalam memberikan warna disebut disebut kromofor dan
memiliki muatan positif. Sebaliknya, pada zat warna asam bagian yang berperan
memberikan zat warna mempunyai muatan negatif zat warna basa lebih banyak
digunakan karena muatan negatif banyak ditemukan didinding sel, membran sel dan
sitoplasmasewaktu proses pewarnaan muatan positif pada zat warna basa akan
berkaitan dengan muatan negatif dalam sel, sehingga mikroorganisme lebih jelas
terlihat (Dwidjoseputro.1998).
Zat warna asam yang bermuatan negatif lazimnya tidak digunakan untuk mewarnai
mikroorganisme, namun biasanya dimanfaatkan untuk mewarnai mikroorganisme,
namun biasanya dimanfaatkan untuk mewarnai latar belakang sediaan pewarnaan.
Zat warna asam yang bermuatan negatif ini tidak dapat berkaitan dengan muatan
negatif yang terdapat pada struktur sel. Kadangkala zat warna negatif digunakan
untuk mewarnai bagian sel yang bermuatan positif, perlu diperhatikan bahwa
muatan dan daya ikat zat warna terhadap struktur sel dapat berubah bergantung
pada pH sekitarnya sewaktu proses pewarnaan (Dwidjoseputro.1998).
Prosedur pewarnaan yang menghasilkan
pewarnaan mikroorganisme disebut pewarnaan positif dalam prosedur pewarnaan ini
dapat digunakan zat warna basa yang yang bermuatan positif maupun zat warna
asam yang bermuatan negatif. Sebaliknya pada pewarnaan negatif latar belakang
disekeliling mikroorganisme diwarnai untuk meningkatkan kontras dengan
mikroorganisme yang tak berwarna. Pewarnaan mencakup penyiapan mikroorganisme
dengan melakukan preparat ulas (Dwidjoseputro.1998).
Sebelum dilakukan pewarnaan
dibuat ulasan bakteri di atas kaca objek. Ulasan ini kemudian difiksasi. Jumlah
bakteri yang terdapat pada ulasan haruslah cukup banyak sehingga dapat terlihat
bentuk dan penataanya sewaktu diamati. Kesalahan yang sering kali dibuat adalah
menggunakan suspensi bakteri yang terlalu padat terutama bila suspensi tersebut
berasal adari bukan media padat. Sebaliknya pada suatu suspensi bakteri bila
terlalu encer, maka akan diperoleh kesulitan sewaktu mencari bakteri pada
preparatnya (Sutedjo.1991).
Untuk pewarnaan yang mengamati
morfologi sel mikroorganisme maka seringkali setelah pembuatan preparat ulas
dilakukan fiksasi diikuti oleh pewarnaan. Fiksasi dapat dilakukan dengan cara
melewatkan preparat diatas api atau merendamnya dengan metanol. Fiksasi
digunakan untuk :
1. Mengamati
bakteri oleh karena sel bakteri lebih jelas terlihat setelah diwarnai
2. Melekatkan
bakteri pada glass objek
3. Mematikan
bakteri
Pada pewarnaan sederhana hanya
digunakan satu macam zat warna untuk meningkatkan kontras antara mikroorganisme
dan sekelilingnya. Lazim, prosedur pewarnaan ini menggunakan zat warna basa
seperti seperti crystal violet, biru metilen, karbol fuchsin basa, safranin
atau hijau malakit. Kadang kala digunakan zat warna negatif untuk pewarnaan
sederhana : zat warna asam yang sering digunakan adalah nigrosin dan merah
kongo.
Prosedur Pewarnaan sederhana
mudah dan cepat, sehingga pewarnaan ini sering digunakan untuk melihat bentuk
ukuran dan penataan pada mikoorganisme bakteri pada bakteri dikenal bentu yang
bulat (coccus), batang (basil), dan spiral. Dengan pewarnaan sederhana dapat
juga terlihat penataan bakteri. Pada coccus dapat terlihat pewarnaan seperti
rantai (stertococcus), buah anggur ( stafilococcus), pasangan (diplococcus),
bentuk kubus yang terdiri dari 4 atau 8 (sarana) (Aditya, Mushoffa. 2010).
Beberapa mikroba sulit diwarnai
dengan zat warna yang bersifat basa, tetapi mudah dilihat dengan pewarnaan
negatif, pada metode ini mikroba dicampur dengan tinta cina atau nigrosin,
kemudian digesekkan diatas kaca objek.Zat warna tidak akan mewarnai bakteri,
akan tetapi mewarnai lingkungan sekitar bakteri. Dengan mikroskop mikroba akan
terlihat tidak berwarna dengan latar belakang hitam.
Metode pengecatan pertama kali
ditemukan oleh seorang ahli bioteknologi dari Denmark yang bernama Christian
Gram pada tahun 1884. Menemukan metode pewarnaan secara tidak sengaja. Dengan
metode ini. Bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua yatu, bakteri gram positif
dan bakteri gram negative. Yang didasarkan dari reaksi atau sifat bakteri
terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh
komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan pada
mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp. Pewarnaan
gram merupakan pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling banyak
digunakan dalam laboratorium mikrobiologi. Pewarnaan itu merupakan tahap
penting dalam pencirian dan identifikasi bakteri (Lay,1994).
Pewarnaan gram memberikan hasil
yang baik, bila digunakan biakan segar yang berumur 24-48 jam. Bila digunakan
biakan tua, terdapat kemungkinan penyimpanan hasil pewarnaan gram. Pada biakan
tua, banyak sel mengalami kerusakan pada dinding-dinding selnya. Kerusakan pada
dinding sel ini menyebabkan zat warna dapat keluar sewaktu dicuci dengan lartan
pemucat. Ini berarti bahwa bakteri gram positif dengan dinding sel yang rusak
tidak lagi dapat memertahankan crystal violet sehingga terlihat sebagai bakteri
gram negatif (Lay,1994).
Cirri-ciri gram negative:
- Struktur
dinding selnya tipis, sekitar 10-45mm, berlapis tiga atau multi layer
- Dinding
slnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan terdapat dalam
lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit 10% dari berat kering, tidak
mengandung asam laktat.
- Kurang
rentan terhadap senyawa penisilin.
- Tidak
resisten terhadap gangguan fisik
Ciri-ciri bakteri gram positif:
- Struktur
dindingnya tebal
- Dinding
selnya mengandung lipid yang lebih normal
- Bersifat
lebih rentan terhadap senyawa penisilin
- Pertumbuhan
dihambat secara nyata oleh zat-zat warna seperti ungu Kristal
- Komposisi
yang dibutuhkan lebih rumit
- Lebih
resisten terhadap gangguan fisik.
Pengecatan gram dilakukan dalam 4
tahap. Yaitu
a. Pemberian cat warna utama
(cairan Kristal violet) berwarna ungu
b. Pengintensifan cat warna
dengan penambahan larutan mordan
c. Pencucian (dekolarisasi)
dengan larutan alcohol asam
d. Pemberian cat lawan yaitu cat
warna safranin
Banyak seenyawa organic berwarna
(zat warna) digunakan untuk mewarnai mikroorganisme untuk pemeriksaan
mikroskopis dan telah dikembangkan prosedur pewarnaan gram untuk :
- Mengamati
dengan baik morfologi mikroorganisme secara kasar
- Mengidentifikasi
bagian-bagian structural sel mikroorganisme
- Membantu
mengidentifikasi atau membedakan organisme yang serupa
C.
Alat
dan Bahan
Alat-alat
-
Mikroskop,
Jarum ose, Cawan petri, Bunsen, Kapas, Pipet tetes, Botol, Lampu bunsen,
Dryglashi, Erlen meyer, Kaca preparat.
Bahan-bahan
-
Alkohol,
Aquades, Koloni bakteri pada media NA, Crystal Violet (gram A), larutan
ladium (gram B), Alkhohol 95% (gram C), Safranin (gram D).
D. Cara Kerja
Ø Dibersihkan preparat glass dengan alkohol 90% kemudian
difiksasi di atas bunsen.
Ø Membuat olesan bakteri dari salah satu koloni yang
tumbuh di media NA atau PDA.
Ø Fiksasi pada nyala api sekitar 1 detik (sambil di
gerakkan agar tidak mati atau rusak).
Ø Warnai olesan bakteri dengan beberapa tetes gram A,
lalu di fiksasi selama 1 detik kemudian biarkan kering.
Ø Miringkan kaca preparat dan semprot dengan aquadest,
kemudian biarkan kering.
Ø Warnai olesan bakteri dengan beberapa tetes gram B,
lalu di fiksasi selama 1 detik, kemudian biarkan selama 2 menit.
Ø Miringkan kaca dan seprot dengan aquadest kemudian
biarkan kering.
Ø Mencuci dengan etanol 95% (gram C) tetes demi tetes
sampai warna ungu tidak mengalir.
Ø Warnai olesan bakteri dengan beberapa tetes gram D,
lalu difiksasi selama 1 detik kemudian biarkan selama 30 detik.
Ø Meringkan kaca preparat dan bilans dengan aquadest di
atas penampang kemudian biarkan kering.
Ø Amati bakteri tersebut dengan mikroskop pada
perbesaran tertentu dan gambarlah.
Ø Menenrukan sifat bakteri berdasarkan sifat pengecatan
gram (untuk bakteri gram positif berwarna ungu, untuk bakteri gram negative berwarna
merah).
E. HASIL
PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
·
HASIL
PENGAMATAN
Perbesaran 10x10/0.25
|
KETERANGAN
|
|||
Bakteri berwarna
merah yang sifatnya gram negatif.
|
F.
PEMBAHASAN
Pewarnaan sederhana yaitu pewarnaan dengan menggunakan satumacam zat warna
dengan tujuan hanya untuk melihat bentuk sel bakteri dan untuk mengetahui
morfologi dan susunan selnya . pewarnaan ini dapat menggunakan pewarnaan basa
pasda umumnya antara lain kristal violet , metylen blue , karbol , fuchsin ,
dan safranin
Pewarnaan negatif yaitu pewarnaan
yang ditujukan terhadap bakteri yang sulit diwarnai, dimana bakterinya tidak
diwarnai melainkan latar belakangnya, metode pewarnaan negatif merupakan suatu
metode perwarnaan umum, dimana digunakan larutan zat warna yang tidak meresap
ke dalam sel-sel bakteri melainkan melatar belakangi sehingga kelihatan
atau nampak sebagai bentuk-bentuk kosong tak berwarna(negatif).
Pewarnaan gram merupakan pewarnaan yang digunakan untuk mengelompokan bakteri
gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat
warna crystal violet dan akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop.
Adapun bakteri gram negatif akan kehilangan zat warna crystal violet setelah
dicuci dengan alkohol, dan sewaktu diberi zat pewarna air fucsin atau safranin
akan tampak berwarna merah. Perbedaan zat warna ini disebabkan oleh perbedaan
dalam struktur kimiawi dinding selnya. Pewarna yang digunakan dalam pewarnaan
gram antara lain : crystal violet, alkohol, safranin, dan iodine.
Pewarnaan spora merupakan pewarnaan dengan menggunakan malachite green dan
safranin, yang dalam hasil pewarnaannya akan muncul warna hijau pada sporanya,
serta warna merah pada sel vegetatifnya yaitu pada Bacillus subtitulis.
Prinsip pewarnaan sederhana didasarkan pada zat warna yang digunakan hanya
terdiri dari satu zat yang dilarutkan dalam bahan pelarut yang merupakan suatu
cara yang cepat untuk melihat morfologi bakteri secara
umum(Dwidjoseputro.1998).
Prinsip pewarnaan negatif yaitu
suatu metode pewarnaan tidak langsung dimana digunakan larutan zat warna yang
tidak meresap kedalam sel bakteru melainkan ke dalam latar belakangnya.
Prinsip pewarnaan gram didasarkan
pada perbedaan struktur dinding sel bakteri ; sehingga menyebabkan perbedaan
reaksi dengan permeabilitas zat warna dan penambahan larutan pencuci
(Dwidjoseputro.1998).
Prinsip pewarnaan spora yaitu
suatu metode pewarnaan yang menggunakan malachite green dan safranin, yang
dalam hasilnya pewarnaan akan muncul warna hijau pada sporanya dan warna merah
pada sel vegetatifnya.
Fuchsin carbon, merupakan
campuaran fuchsin fenol dan dasar yang digunakan dalam prosedur pewarnaan
bakteri. Hal ini umumnya digunakan dalam pewarnaan mikrobkateria karena
memiliki ketertarikan untuk asam mycolic yang ditemukan di dinding sel mikroba,
carbol fuchsin juga digunakan sebagai antiseptik tropikal.
Crystal violet atau ungu gentian
adalah pewarna triarylmethane. Pewarna ini digunakan sebagai histologis noda
dalam metode gram klasifikasi bakteri. Crystal violet memiliki sifat sifat anti
bakteri, jamur dan obat cacing, dan sebelumnya penting sebagai antiseptik
topikal.
Nigrosin adalah campuran dari
pewarna sintesis hitam yang dibuat dengan memanaskan campuran nirobenzena,
anilin, dan hidroklorida. Industri utamanya adalah sebagai pewarna untuk lak,
pernis, dan tinta penanda pena. Didalam biologi, nigrosin digunakan untuk
pewarnaan negatif bakteri. Bentuk dan organisme yang terlihat sebagai warna
bebas menguraikan terhadap latar belakang gelap. Keuntungan dari menggunakan
metode ini daripada noda positif biasa seperti fuchsin, metilen blue, atau
carbol, ialah bahwa fiksasi sebelumnya oleh panas atau alkohol tidak diperlukan
sehingga organisme terlihat. Selain itu pewarnaan negatif dengan nigrosin dapat
mengungkapkan beberapa mikroorganisme yang tidak dapat diwarnai dengan
metode biasa.
Lugol’s yodium, juga dikenal
sebagai solusi lugol, merupakan solusi dari iodium dan iodida dalam air.
Larutan yodium lugol digunakan sebagai antiseptik dan desinfektan, dan untuk
desinfikasi darurat air minum, dan sebagai reagen untuk deteksi pasti di dalam
laboratorium, pewarnaan dan tes medis (Dwidjoseputro.1998).
Safranin dalah noda biologis yang
digunakan dalam histologi dan sitologi. Safranin digunakan sebagai conterstain
dalam beberapa protokol pewarnaan. Mewarnai seluruhinti sel darah merah. Ini
adalah counterstain klasik dalam gram stain. Hal ini juga dapat digunakan untuk
deteksi tulang rawan, musin dan butiran sel mast. Safranin biasanya memilki struktur
kimia. Ada juga trimetil safranin kedua senyawa berperilaku dasarnya identik
dan aplikasi pewarnaan biologi dan kebanyakan prosedur safranin tidak
membedakan diantara keduanya. Persiapan safranin komersial sering mengandung
campuran dari kedua jenis. Safranin juga digunakan sebagai indikator redok
dalam kimia analitik.
Fiksasi adalah suatu metode
persiapan untuk menyiapkan suatu sampel agar tampak realistik dengan
menggunakan grutaldehid dengan proses pemabakaran. Fiksasi bertujuan untuk
mematikan bakteri dan melekatkan sel bakteri pada objek glass tanpa merusak
struktur selnya. (Dwidjoseputro.1998).
Menurut hasil pengamatan, pada
pewarnaan sederhana dikemukakan bakteri dengan bentuk basil dan berwarna ungu
dalam pembesaran 400. Pada pewarnaan negatif, tidak ditemukan terlalu banyak
bakteri, ditemukan bakteri dengan bentuk coccus dan pewarnaan negatif mewarnai
belakangnya berwarna biru gelap dan bakteri berwarna kuning. Pada pewarnaan
gram ditemukan bakteri jenis gram negatif dengan warna merah dan memiliki
bentuk basil pada perbesaran mikroskop hingga 400. Sedangkan, pada perwarnaan
spora yang menggunakan malachite green dan safranin, spora seharusnya berwarna
hijau, tetapi pada hasil pengamatan yang terlihat hanya warna merah dari
safranin, yaitu sel vegetatifnya dengan bentuk coccus pada perbesaran 400 di
mikroskop.
Beberapa faktor kesalahan pada
praktikum antara lain pemberian zat warna yang berlebihan sehingga sel bakteri
tidak nampak, kurang maksimalnya dalam proses fiksasi sehingga masih ada
bakteri yang belum mati, dan faktor yang lain adalah pada proses pencucian
terlalu deras dalam membilas zat warna dengan air sehingga dapat menyebabkan
bakteri larut terbawa air.
·
KESIMPULAN
Dari percobaan pewarnaan yang
dilakukan dapat ditarik kesimpulan :
- Pewarnaan
bakteri dipengaruhi faktor-faktor antara lain fiksasi, pelunturan warna,
substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup
- Perbedaan
pada garam negatif dan gram positif terletak pada warnanya pada gram positif
berwarna ungu kareana dapat mempertahankan zat pewarna kristal violet serta
perbadaan terjadi pada dinding selnya
VI. PENGARUH TEMPERATUR TERHADAP PERTUMBUHAN
BAKTERI
A.
TUJUAN
PRAKTIKUM
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui
pengaruh temperatur terhadap pertumbuhan bakteri.
B.
TINJAUAN
PUSTAKA
Suhu inkubasi yang memungkinkan pertumbuhan tersepat
selama periode waktu yang singkat (12 sampai 24 jam) yang dikenal sebagai suhu
pertumbuhan yang optimum. PH optimum pertumbuhan kebanyakan bakteri terletak
6,5 sampai 7,5. Namun, beberapa yang dapat tumbuh dalam keadaan yang sangat
masam atau yang sangat alkalin. Kebanyakan yang mempunyai nilai PH minimum dan
maksimum ialah 4 dan 9 (Pelczar, dkk., 1986). Kebanyakan bakteri dapat tumbuh pada kisaran sebesar pH 3 – 4
unit pH atau kisaran 1000 – 10000 kali konsentrasi ion hydrogen. Kebanyakan
bakteri mempunyai pH optimum sekisar pH 6 – 7.5, Khamir mempunyai pH 4-5 dan
tumbuh pada kisaran pH 2.5 – 8 dan kapang mempunyai pH optimum antara 5 dan 7
dan dapat tumbuh pada kisaran pH 3 – 8.5.
C.
ALAT
DAN BAHAN
ALAT : 4 tabung PDA, pinset, lampu bunsen,cawan petri.
BAHAN : biakan dari
wortel busuk.
D.
CARA
KERJA
1.
Inukulasikan 4
tabung NA (nutrien agar) petri masing-masing satu ose biakan murni bakteri.
2.
Pisahkan
masing-masing tabung tersebut dan inukulasikan pada temperatur suhu kamar ±
C
suhu almari es 
C dan kontrol selama 48 jam.
C
suhu almari es C dan kontrol selama 48 jam.
3.
Catat pada pertumbuhan masing-masing tabung dan gunakan
tanda-tanda untuk pertumbuhan tersebut.
+++ : pertumbuhan
luar biasa
++ : tumbuh baik
+ : tumbuh
sedikit
- : tidak
tumbuh
E.
HASIL
PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
KONTROL
|
SUHU KAMAR
|
LEMARI ES
|
|
A
|
B
|
||
+
|
++
|
+++
|
-
|
Dari pengamatan diatas
- Media kontrol A sedikit terkontaminasi mungkin karena peralatan
yang tidak seteril atau pada saat penuangan kedalam petri dilakukan tidak
aseptik.
- Media kontrol B terkontaminasi oleh bakteri mungkin
karena peralatan yang tidak seteril atau pada saat penuangan kedalam petri
dilakukan tidak aseptik.
- Media pada suhu kamar pertumbuhan bakteri sangat cepat
dan terdapat pigmen berwarna merah.
- Media pada lemari es tidak terdapat perkembangan bakteri
karena pertumbuhan bakteri terhambat pada suhu 5° - 8°C Pada suhu kulkas
F.
KESIMPULAN
- Dari
hasil pengamatan yang telah dilakukan pada praktikum ini maka dapat disimpulkan bahwa pada suhu rendah pertumbuhan bakteri tidak dapat
berkembang, sedangkan pada suhu kamar pertumbuhannya sangat pesat jadi peran
lingkungan juga mempengaruhi pertimbuhan bakteri.
V. MORFOLOGI dan SITOLOGI BINTIL AKAR
A.
TUJUAN
PRAKTIKUM
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk
mengetahui morfologi dan sitologi bintil akar.
B.
TINJAUAN PUSTAKA
Kacang tanah (Arachis hypogaea L.) secara ekonomi
merupakan tanaman kacang-kacangan yang menduduki urutan kedua setelah kedelai,
sehingga berpotensi untuk dikembangkan karena memiliki nilai ekonomi tinggi dan
peluang pasar dalam negeri yang cukup besar. Biji kacang tanah dapat digunakan
langsung untuk pangan dalam bentuk sayur, digoreng atau direbus, dan sebagai
bahan baku industri seperti keju, sabun dan minyak, serta brangkasannya untuk
pakan ternak dan pupuk (Marzuki, 2007).
Hasil tanaman kacang tanah di Indonesia tergolong
rendah, karena masih berada di bawah potensi produksi. Hasil kacang tanah lokal baru mencapai
1,45 ha, lebih rendah dibanding dengan
potensi hasil varietas unggul seperti; varietas Panter dan Singa yang dapat
mencapai hasil 4,5 t ha(Adisarwanto, 2000). Hal ini menunjukkan bahwa hasil
tanaman kacang tanah masih dapat ditingkatkan, walaupun saat ini tersedia
beberapa varietas unggul namun belum banyak diketahui oleh petani, dan petani
lebih mudah memasarkan varietas lokal yang mempunyai bentuk biji dan polong
yang disukai oleh konsumen serta mempunyai keunggulan spesifik lainnya seperti
ketahanan terhadap penyakit layu (Adisarwanto, 2000). Sumarno dkk. (1989)
menyatakan bahwa 66 % kacang tanah di Indonesia ditanam di lahan kering dengan
rentang hasil antara 0,5 hingga 1,5 t ha.
Nugrahaeni dan Kasno (1992) juga menyatakanbahwa
kacang tanah sebagian besar 66 % dihasilkan di lahan kering dan sisanya 34%
dihasilkan di lahan basah. Hasil kacang tanah di lahan kering masih jauh lebih
rendah, hanya 2 t ha dibandingkan dengan hasil kacang tanah di lahan basah yang
dapat mencapai 4,5 t ha (BPPP, 1999). Produktivitas lahan dan produksi tanaman
di lahan kering masih rendah karena sebagian besar lahan kering mempunyai
tingkat kesuburan rendah dan sumber air terbatas hanya tergantung pada curah
hujan yang distribusinya tidak dapat diatur sesuai dengan kebutuhan tanaman
(Andrianto dan Indarto, 2004).
Hasil tanaman ditentukan oleh ketersediaan unsur
hara baik unsur hara makro seperti; C, H, O, N, P, K, Ca, Mg, dan S serta unsur
hara mikro seperti; Fe, Zn, Co, Mn, Mo,
Bo, dan Cl (Gardner, dkk. 1991). Cekaman kekeringan menjadi kendala produksi
tanaman kacang tanah yang kebanyakan ditanam di lahan kering. Cekaman
kekeringan juga menyebabkan tanaman memperlihatkan gejala defisiensi hara
karena penyerapan hara terhambat.
Cekaman kekeringan merupakan kendala bagi
peningkatan produksi tanaman di lahan kering. Pertumbuhan tanaman dapat
terhambat bila unsur hara kurang tersedia. BOA (2008) melaporkan bahwa
penggunaan bahan organik tidak hanya menambah ketersediaan unsur hara bagi
tanaman, tetapi juga menciptakan kondisi yang sesuai untuk tanaman dengan
memperbaiki aerasi, mempermudah penetrasi akar dan memperbaiki kapasitas
menahan air. Munip dkk. (1999) juga
menyatakan bahwa kekurangan air selama fase-fase pertumbuhan kacang tanah pada
stadia pembentukan hingga pengisian polong dapat menyebabkan penurunan 3 hasil
yang cukup besar. Salah satu strategi mengatasi masalah ini adalah dengan
menggunakan pupuk kascing dan bio-urin sapi.Di Kabupaten Klungkung, Kecamatan
Dawan, Desa Pesinggahan, Dusun Sukahati yang dikenal dengan daerah Bukit Tengah
dengan ketinggian ± 200 m di atas permukaan laut (dpl.) memiliki tingkat
kesuburan lahan rendah dan merupakan faktor pembatas utama dalam proses
produksi kacang tanah. Kacang tanah yang dikembangkan disamping hasil berupa
biji juga brangkasannya digunakan sebagai makanan ternak karena sebagian besar
petani disana memelihara ternak sapi. Brangkasan diberikan ada yang dalam
keadaan masih segar, dan sisanya dikeringkan kemudian disimpan untuk cadangan
makanan ternak dimusim kemarau (hasil wawancara).
Rendahnya kesuburan lahan tidak diimbangi dengan
pemupukan yang optimum oleh petani. Petani umumnya memupuk tanaman kacang tanah
menggunakan urea saja dalam dosis yang tidak tepat dan menggunakan kotoran sapi
kemudian disebar seadanya pada saat pengolahan tanah, tanpa adanya upaya fermentasi kotoran sapi
sebelumnya sedangkan urin sapi belum dimanfaatkan.
Marzuki,
(2007) menyatakan bahwa kacang tanah termasuk tanaman leguminosae yang mampu mengikat nitrogen dari udara.
Kemampuannya mengikat nitrogen baru dimiliki pada umur 15-20 hari setelah
tanam. Pupuk nitrogen tetap diperlukan dengan dosis 15-20 kg N hapada awal
pertumbuhan. Jadi keperluan bio-urin untuk mencapai 20 N haadalah ± 5500 liter
karena dari hasil analisis bio-urin menunjukkan kandungan N adalah 0,36 %. Potensi
urin ternak sapi jantan dengan berat +
300 kg rata-rata menghasilka 8 liter –
12 liter urin hari, sedangkan sapi induk dengan berat + 250 kg menghasilkan 7,5 liter – 9 liter urin
hari, sehingga per bulan satu ekor sapi jantan dengan berat + 300 kg akan
menghasilkan 240 liter – 360 liter urin dan satu ekor sapi induk dengan
berat + 250 kg menghasilkan 225
liter – 270 liter urin (Adijaya,
dkk. 2008) sedangkan Parwati,
dkk. (2008) menyatakan seekor sapi jantan dengan berat di atas 300 kg di
daerah Kintamani rata-rata menghasilkan
urin 19,7 liter hari. Oleh karena itu kebutuhan bio-urin sapi 5.500 liter dapat
dipenuhi dengan memelihara ± 2 ekor sapi selama setahun.Menambah ketersediaan
unsur hara dengan menggunakan pupuk
kascing dapat mengatasi pengaruh kekurangan hara pada tanaman.
Pupuk kascing merupakan salah satu pupuk organik
yang memiliki kelebihan dari pupuk organik lainnya karena pupuk kascing mempunyai C/N rasio rendah. Pupuk kascing berperan dalam menambah unsur
hara dan mempercepat ketersediaan unsur harabagi tanaman. Pupuk kascing dapat memperbaiki aerasi dan
mengurangi kepadatan tanah serta menambah bahan organik tanah (BOA, 2008).Pupuk
kandang dihasilkan oleh ternak. Selain menghasilkan pupuk kandang padat ternak
juga menghasilkan urin yang dapat dijadikan pupuk bagi tanaman. Informasi tentang pemanfaatan urin ternak
seperti halnya urin sapi sebagai pupuk masih sangat terbatas, oleh karena itu
penelitian tentang aspek tersebut perlu dilakukan pada tanaman kacang tanah
yang merupakan tanaman yang banyak dikembangkan di daerah ini.
C.
ALAT
DAN BAHAN
ALAT
: pisau / silet yang tajam
BAHAN : tanaman kacang tanah
D.
CARA
KERJA :
1.
Mengamati
letajk/cara terikatnya bentuk dan ukuran bintil akar dari tanaman kacang tanah
yang diamati.
2.
Membuat gambar dan
macam-macam kacang tanah.
3.
Membuat irisan
melintang bintil akar beserta tempat ikatan bintil akar dengan akarnya memakai
silet.
4.
Mengamati dibawah
mikroskop setelah diberi setetes air dan dituytup dengan kaca penutup.
E.
Hasil
pengamatan :
Gambar
bintil akar dengan (mikroskop)
Secara mikroskopis
Perbesaran 10x10/0,25
|
KETERANGAN
|
|||
Secara fisual
Perbesaran 10X10/0,25
|
KETERANGAN
|
|||
F.
PEMBAHASAN
a.
Dari hasil
pengamatan diketahui bahwa letak atau terikatnya bintil akar adalah pada akar
dan membentuk bulatan-bulatan kecil yang melekat pada akar kacang tanah.
b.
Setelah dilakukan
pengamatan dengan mikroskop, terbentuk preparat gambar Rhizobium menempel pada
jaringan bintil akar kacang tanah
G.
KESIMPULAN
a.
Bintil akar
bentuknya seperti bulatan-bulatan kecil yang melekat pada akar kacang tanah.
b.
Rhizobium
terdapat pada jaringan bintil akar
kacang tanah.
DAFTAR PUSTAKA
Aditya, Mushoffa. 2010. Teknik Pewarnaan Bakteri.http://mushoffaditya.blogspot.com/2010/01/teknik-pewarnaan-bakteri.html.
11 November 2010
Anonim,2012.
Farmakope Indonesia Ed.IV.Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Ariandi, 2010, Lap. 1 Mikrobiologi
Pengenalan Alat Lab, http//www.scribd.com/doc/27603070
Lap-1Mikrobiologi-Pengenalan-Alat-Lab/, 20 Maret 2012.
Dwijoseputro,
d. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan.
.
Hadioetomo,
R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : Gramedia
Sutedjo.1991. Mikrobiologi Umum Pewarnaan Gram. http //pewarnaan
bakteri\Mikroum…Pewarnaan Gram « RIZQI FAJRIANA BLOG’S.htm/. 11 November 2010.
Lay,1994. Pengamatan
Bentuk
Bakteri.http://pebrinmanurung.blogspot.com/2010/10/pengamatan-bentuk-bakteri.html.
11 November 2010.
Waluyo,
L.2005. Mikrobiologi Umum.cet. kedua. UMM Press. Malang.
Djide, 2006. Bahan- bahan
Mikroorganisme. ITB. Bogor raya.
Pelczar, M.J dan E.C.S Chan. 1986.
Dasar-Dasar Mikrobiologi 1. UI – Press. Jakarta.
F Link
·
http://fheeyraredzqiiy.wordpress.com/2009/12/08/laporan-praktikum-pengenalan-alat-mikrobiologi-2/
,20 Maret 2012
·
http://laporanpraktikumpertanian.Blogspot.com/2010/12/mikrobiologi-dasar-pengenalan-alat-kerja-laboratorium.Html/
,20 Maret 2012
